微量移液器的規范使用
在基層動物疫病檢疫、疫苗免疫效果評價以及實踐應用中,微量移液器的使用越來越普及。 在使用微量移液器的過程中,存在很多問題,其中嚴重、普遍的問題是微量移液器的不規范使用, 不規范使用又可引發諸多問題,最終影響實驗結果。
1、選擇移液器
在 96 孔微量板上操作, 所需血清的量一般為 25滋l。 因此,所用的微量移液器量程與 25滋l 接近為, 因為量程越接近目標體積,移液準確性越好[6]。如果選用的移液器其量程與目標體積相差過大則不合適。比 如,用量程小于 25滋l 的移液器吸取 25滋l,則至少需要 2 次操作,操作次數增加,引起誤差的幾率可能就會相應增加;如果用量程遠大于 25滋l 比如 200滋l 或者以上的移液器吸取 25滋l,則賽多利斯移液器內部的活塞處于高壓狀態,在整個實驗多步驟操作過程中,活塞始終如此。久而久之,活塞可能受損而影響移液的準確性。
2、調節量程
順時針調節則增加量程,逆時針調節則減少量程[7]。移液器不用時,其量程一般放到(活塞松弛不受壓)。 因此,吸取 25滋l 液體時,一般需要將移液器的量程調小。 調節時慢慢逆時針旋轉調節按鈕,特別是快到目標量程時,更要緩慢仔細。整個調節過程速度都不宜過快,否則徒增磨損。在實驗操作中,如果需要從小量程調節到大量程,則慢慢順時針旋轉調節按鈕,調至超過目標量程至少 1/4 圈處,再反轉重新調節至目標量程。 這樣做,可排除機械間隙,使得目標量程值準確可靠[8]。量程的調節,無論調小或者調大,動作均應輕緩,調節的范圍均應在移液器的量程范圍之內。 否則,易造成移液器損壞而影響準確度。
賽多利斯移液器mLINE系列
3、安裝吸頭
吸頭與移液器相配套。 吸頭要筆直,彎曲了則應棄用。 使用非原裝吸頭時,若同規格吸頭的長度和尖端直徑有明顯差別,則應該選用其長度和直徑一致的,否則會影響移液的準確度[10]。
安裝吸頭時,稍用力將移液器下端垂直插入吸頭,再小幅度左右旋轉即可。 安裝時不宜用力過猛或使勁跺移液器,用力過猛,吸頭會套得太緊難以脫卸,也會增加吸嘴在強力摩擦下的磨損,長此以往移液器的密封性會受到影響。 使勁跺移液器,則易使其內部結構松弛而影響移液的準確度。
4、檢查密合性
吸取 25滋l 所用的移液器量程小, 可以采用以下方法檢測移液器的氣密性: 吸取 25滋l液體后,將吸頭尖端垂直浸入液面不動,觀察1min 左右,如果吸頭內液面不下降,說明移液器不漏液,否則漏液[11]。 如果漏液,需檢查吸頭是否旋緊、活塞是否正常等。
5、吸取液體
吸取液體之前,將移液器、吸頭、96 孔微量板、試管架、液體等事前放置于工作環境,使它們處于相同溫度,接近于室溫。 因為移液器的理想移液溫度是 21.5℃(±1℃),在恒溫下移液效果較好[12]。吸取液體時,先潤洗吸頭再吸取液體。 具體做法如下:四指握住移液器,大拇指按下移液器頂端按鈕至第一停點不動(吸頭內的空氣被排出),將吸頭尖端垂直沒入液面下,再慢慢松開大拇指但大拇指不離開按鈕,勻速吸取液。體。 液體吸取完畢,按鈕也同時回到原點。 此 時,吸頭尖端不要離開液面,將大拇指按下移液器頂端按鈕至第一停點,將吸頭內的液體排出。 如此反復吸、放 3~5 次來潤洗吸頭。 之后,按照上述方法吸取液體。吸取液體時有幾點需要注意:一是潤洗頭,正式吸取液體之前,將吸頭潤洗幾遍,使吸頭內外形成同一液膜, 減少排液量的誤差[13]。二是要垂直吸取液體, 若傾斜著吸取液體,吸取量則會變大[11]。 三是吸頭尖端插入液面之前要排出吸頭內的空氣,否則吸頭內的空氣會進入液體里,產生氣泡,影響實驗操作和實驗結果, 這在 96 孔微量反應板上進行血清倍比稀釋時要特別注意。四是吸頭尖端要始終保持在液面下,即吸頭尖端跟隨液面走,液面下降吸頭也下降,液面上升吸頭也上升,這樣可以保證吸始終能吸上液體且吸頭尖端以上的部分不粘上液體。五是按壓下去的大拇指要慢慢松開而絕非突然松開至按鈕回到原點,大拇指松開過快,吸取的液體可能會沖入移液器內造成污染或是吸取的液體達不到所需的體積。六是吸液完成之后略停一下,再將移液器吸頭尖端移出液面。