3D細胞培養模型之移液優化方案
由于3D模型可以更準確地模擬真實組織或腫瘤中的細胞行為,在癌癥研究等許多研究領域,對3D模型的研究興趣正在不斷增加。構建3D細胞培養模型比建立2D模型更具有挑戰性,通常需要試驗多種基質和技術,才能獲得佳結果。
本研究重點放在利用微絲組裝來模擬體內環境中的細胞外基質,以創建用于生物醫學應用的功能性組織,目前正在開發一種體外乳腺癌模型,用于評估候選藥物并作為生物醫學研究的創新系統。
Q與其他 3D 基質相比,Biosilk™ 的主要優勢是什么?
Biosilk™ 的主要優勢在于細胞具有高度增殖性,對比封裝于水凝膠中的細胞,可更有效地進行擴散。此外,Biosilk™ 可用于獲得各種不同的支架,例如泡沫、膜和纖維。這些支架也可以相互組合,從而創建共培養系統。
初步研究結果表明,與2D培養相比,在3D Biosilk™ 中培養的相同類型細胞表現出更高的侵襲性標記。
Q 96孔板形式的 3D Biosilk™ 乳腺癌模型的詳細描述
目標是獲得3D模型,其中乳腺癌細胞生長嵌入Biosilk™ 泡沫。每個泡沫(厚度約130 μm,直徑約700 μm) 培養在96孔板的孔中作為浮動3D構建體培養(見圖1)。將Biosilk™ 泡沫培養一周,用于藥物試驗、增殖分析、基因表達水平測量和免疫熒光
目前,這一方法的主要局限是通量低,造成這一問題的原因在于創建每個泡沫需要:A. 使用單通道手動移液器(賽多利斯Mline® 移液器);B. 創建在聚四氟乙烯(Teflon)表面上,然后分離 Biosilk™ 泡沫,并轉移至96孔板。
目前,我們正在優化發泡方案以實現高通量。在該研究方向上,我正在將3D Biosilk™ 浮動形式與“半3D形式”進行比較,后者是指將泡沫直接超低附著于96孔板,并保持附著在底部。請參閱表 1 中有關增加通量的詳細工作流程。這種格式也可與使用多通道電動移液器(例如賽多利斯Picus® Nxt 移液器)添加的細胞培養基兼容。下一步,我們將評估使用8通道Tacta® 移液器在半3D形式中直接將泡沫附著于96孔板;這似乎是非常有潛力的一種選擇,既可以增加通量,又可滿足我們快速混合的需求。
Q您測試賽多利斯Picus® Nxt 電動移液器的主要動機是什么?
主要原因是嘗試采用一種新的、更高通量的方案,形成3DBiosilk™ 泡沫。與之前的方案相比,新方案的重要變化表現為:(1)使用Picus® Nxt 移液器(8通道,5–120μL)同時對8個。Biosilk™ 泡沫進行發泡處理;(2)發泡操作直接在96孔板中完成。
Q您在使用賽多利斯Picus® Nxt 電動移液器時是否遇到任何問題或困難?
移液器速度可能稍微有點低,無法產生類似于手動控制移液器所獲得的泡沫。這樣一來,3D結構中的氣泡更大,從而導致終的Biosilk™ 泡沫整體穩定性較差。Picus® Nxt 移液器的增加速度選項設置可使得產生的氣泡更小,由此使Biosilk™ 泡沫更穩定。
您對賽多利斯Picus® Nxt 電動移液器有何看法?
Picus® Nxt 移液器編程直觀,重要的是,它在3D Biosilk™ 泡沫產品的規模化生產方面顯示出了巨大潛力。目前,Biosilk™ 泡沫的手動起泡大約需要15秒。而一支8通道移液器將使我們的速度提高八倍。這將提高細胞存活率和操作員的人體工程學條件。
文章轉自:公眾號 賽多利斯實驗室